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技術文章

恒遠生物|牛血清淀粉樣蛋白A (SAA)ELISA實驗說明

點擊次數:2163   發布時間:2024/1/30 10:34:57

檢測范圍:

25μg/L -900μg/L

使用目的:

本試劑盒用于測定牛血清、血漿及相關液體樣本中血清淀粉樣蛋白A (SAA)含量。

實驗原理:

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中牛血清淀粉樣蛋白A (SAA)水平。用純化的牛血清淀粉樣蛋白A (SAA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入血清淀粉樣蛋白A (SAA),再與HRP標記的血清淀粉樣蛋白A (SAA)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血清淀粉樣蛋白A (SAA)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中牛血清淀粉樣蛋白A (SAA)濃度。

標本要求 :

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟:

1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

800μg/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
400μg/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
200μg/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
100μg/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
50μg/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30后棄去,如此重復5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 

7.溫育:操作同3。

8.洗滌:操作同5。

9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

完整版說明書可咨詢我司業務員。上海恒遠生物科技有限公司是國內ELISA試劑盒you質供應商,代理銷售不同ELISA試劑盒品牌的進口/國產ELISA試劑盒,業供應科研實驗所需的培養基,抗體,動物血清血漿,標準品對照品,化學試劑,酶聯免疫試劑盒,白介素試劑盒,jin標檢測試劑盒,微生物,蛋白質,ELISA種屬涵蓋廣,憑借多年行業經驗,完善的售后服務,高質量的產品。如果您有實驗上的問題歡迎來咨詢。

原創作者:上海恒遠生物技術發展有限公司

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